poliacrilamida La electroforesis en gel (PAGE) es una técnica ampliamente utilizada en bioquímica, biología molecular y química analítica para separar y analizar proteínas, ácidos nucleicos y otras macromoléculas en función de su tamaño y carga. La poliacrilamida es la matriz de gel utilizada en esta técnica.

Aquí hay una descripción general del proceso:

1. Preparación del gel: Los geles de poliacrilamida se forman polimerizando monómeros de acrilamida y bisacrilamida. La acrilamida proporciona la estructura del gel, mientras que la bisacrilamida actúa como agente reticulante. El porcentaje de bisacrilamida determina el tamaño de poro del gel, afectando la resolución de separación para diferentes rangos de peso molecular. El gel normalmente se moldea en formato vertical u horizontal.

2. Carga de muestras: Las muestras que contienen las moléculas que se van a separar se mezclan con un agente desnaturalizante (p. ej., dodecilsulfato de sodio - SDS) y un agente reductor (p. ej., β-mercaptoetanol) para desnaturalizar y linealizar las moléculas. Normalmente, la mezcla se calienta para desnaturalizar aún más las proteínas. Se añade una carga eléctrica a las muestras para facilitar el movimiento durante la electroforesis.

3. Electroforesis: el gel se sumerge en una solución tampón y se coloca entre dos electrodos. Las moléculas cargadas negativamente migran hacia el electrodo cargado positivamente (ánodo) a través de la matriz de gel bajo la influencia de un campo eléctrico. La tasa de migración está determinada por el tamaño y la carga de las moléculas. Las moléculas más pequeñas se mueven más rápido y migran más lejos, mientras que las moléculas más grandes son más lentas y permanecen más cerca de la posición de carga.

4. Visualización: Después de la electroforesis, las moléculas separadas se visualizan utilizando métodos de tinción específicos para el tipo de moléculas analizadas. Por ejemplo, las proteínas se pueden teñir con azul brillante de Coomassie o tinción con plata, mientras que los ácidos nucleicos se pueden visualizar con bromuro de etidio o tintes fluorescentes. Luego, el gel teñido se fotografía o se escanea para su análisis.

5. Interpretación: El patrón resultante o perfil de bandas en el gel se analiza para inferir información sobre el tamaño, la cantidad y la pureza de las moléculas separadas. Generalmente se incluyen marcadores de peso molecular de tamaños conocidos en el gel para ayudar a determinar el tamaño aproximado de las moléculas desconocidas.

poliacrilamida La electroforesis en gel es una técnica versátil que se puede utilizar en diversas aplicaciones, incluido el análisis de proteínas, la secuenciación de ADN, la clonación molecular y el estudio de la cinética enzimática. Permite a los investigadores separar y visualizar macromoléculas en función de sus características únicas, lo que permite una mejor comprensión de su estructura y función.